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常用細(xì)胞組織等樣品提取total RNA，其中包含mRNA、lncRNA、miRNA和circRNA等所有的RNA種類，暫沒有方法直接提取circRNA。但可以對total RNA進(jìn)行RNase R消化處理，以使circRNA得到富集。

CircRNA的形成和線性RNA不同，因此對circRNA的過表達(dá)不能直接將序列連接到常規(guī)的真核表達(dá)載體（如pcDNA3.1）來進(jìn)行。 已明確的circRNA形成依賴于側(cè)翼序列中的反向互補(bǔ)序列（RCMs，如Alu元件）或與能調(diào)控circRNA生成的蛋白（如QKI）的結(jié)合位點(diǎn)，因此構(gòu)建載體時(shí)可以在circRNA序列上下游分別增加一段反向

考慮感興趣的circRNA是否能翻譯蛋白，可先以O(shè)RF Finder分析序列基礎(chǔ)，預(yù)測是否有合適的ORF。有一個(gè)跨越j(luò)unction的ORF是最理想的，序列內(nèi)部不跨越j(luò)unction的ORF可能和mRNA一樣，沒辦法特異研究circRNA。